伯優(yōu) ? Direct Bescript One Step RT-qPCR Kit 是采用獨有抗抑制 DNA 聚合酶、MMLV 反轉(zhuǎn)錄酶，配合獨特的反應(yīng)體系，可直接取血清、分泌物等樣本用于擴增的一步法反轉(zhuǎn)錄定量擴增的 qPCR 預(yù)混免提取型試劑盒。使用本產(chǎn)品進行 RT-qPCR 反應(yīng)，只需在此基礎(chǔ)上再加入引物、探針、模板和滅菌 DEPC 水即可。
1、特異性高：采用獨特的 MMLV 反轉(zhuǎn)錄酶和熱啟動酶可抑制非特異性反應(yīng)，并保證多重反應(yīng)的靈敏性。
2、靈敏度好：可精確定量低至 10 拷貝的模板。
3、線性范圍廣：可精確定量 9 個數(shù)量級。
4、通用性好：并兼容所有的熒光 PCR 儀。
5、使用方便：實驗過程無需冰上操作。
儲存條件
-20℃保存 12 個月，使用前充分溶解混勻。
短期使用可放 4℃保存，避免反復(fù)凍融。
注意事項
1. 本制品不含內(nèi)參 ROX 染料。
2. 請穿實驗服并戴一次性手套操作，以防影響人體健康。
使用方法
1. 反應(yīng)液配制
反應(yīng)液 成分 | 體積 | 終濃度 |
Direct One Step Probe Mix | 6μl | 1× |
Direct One Step Enzyme Mix | 2μl | 1× |
正向引物（10μM） | 0.5μl | 200nM |
反向引物（10μM） | 0.5μl | 200nM |
探針（10μM） | 0.25μl | 100nM |
模板 | 1-5μl | |
總計 | 補 ddH2 O 至 25μl | |
*1）分泌物樣本如有保存液，則直接取 1 -5μl 用于上樣；
*2）分泌物樣本無保存液，請加 200μl 保存液后，直接取 1 -5μl 用于上樣。
*3）血清樣本，直接取 1 -5μl 用于上樣。
2. PCR 循環(huán)條件的設(shè)定
步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) | |
1 | 反轉(zhuǎn)錄 | 50℃ | 20min | 1 cycle |
2 | 預(yù)變性 | 95℃ | 5min | 1 cycle |
3 | 變性 | 95℃ | 10s | 40 cycles |
4 | 退火、延伸 | 60℃ | 45s | |
步驟 4 收集熒光信號 | ||||
3. 實驗結(jié)果分析
根據(jù)擴增曲線的結(jié)果進行熒光定量 PCR 數(shù)據(jù)分析。
貨號 | 產(chǎn)品 | 規(guī)格 |
21614 | 伯優(yōu) ? Direct Bescript One Step RT-qPCR Kit | 100rxns |
500rxns |
